液相色譜作為一個既能用于微量組分的分析測定，又能用于大量的制備分離的儀器，具有靈活多樣的特點，其應用范圍已超過其他各種分離方法，尤其在中藥樣品的分析分離方面更為突出。而液相色譜在使用過程中容易出現一些問題，如果不對這些問題進行解決，就可能會影響分析結果，從而影響整個實驗。因此，今天我們就來討論一下液相色譜使用過程中可能會出現的問題。
 

　　在液相色譜使用過程中，比較常見的主要有柱壓異常(包括過高或者過低)、峰形異常、基線漂移等。下面我們就來討論一下這幾個問題的原因和解決方法。
 

　　1、柱壓異常
 

　　柱壓異常包括過高與過低。柱壓過高是常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應該分段進行檢查。
 

　　2、峰形異常
 

　　1)所有峰均為負峰。解決方法：信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒；光學裝置尚未達到平衡。

　　2)所有峰均為寬峰。解決方法：系統未達到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多；色譜柱尺寸及類型選擇不正確；色譜柱或保護柱被污染或柱效降低；溫度變化造成的影響。

　　3)色譜圖中未出峰。解決方法：系統未進樣或樣品分解；泵未輸液或流動相使用不正確；檢測器設置不正確；針對以上情況成因作相應調整即可。

　　4)一個峰或幾個峰是負峰。解決方法：流動相吸收本底高；進樣過程中進入空氣；樣品組分的吸收低于流動相。

　　5)所出峰比預想的小。解決方法：樣品黏度過大；進樣品故障或進樣體積誤差；檢測器設置不正確；定量環體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現問題。

　　6)出現雙峰或肩峰。解決方法：進樣量過大；樣品濃度過高；保護柱或色譜柱柱頭堵塞；保護拄或色譜柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。

　　7)前伸峰。解決方法：進樣量或樣品濃度高；溶解樣品的溶劑較流動相極性強；保護柱或色譜柱污染或失效。

　　8)拖尾峰。解決方法：柱超載，降低樣品量；增加柱直徑采用較高容量的固定相；峰干擾，對樣品進行清潔過濾；調整流動相；硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相pH值；柱內燒結不銹鋼失效，更換燒結不銹鋼；加在線過濾器，對樣品進行過濾；死體積或柱外體積過大，將連接點降至低；盡可能使用內徑較細的連接管；柱效下降，更換柱子；采用保護柱，對柱子進行再生。

　　9)出現鬼峰。解決方法：進樣閥殘余峰，在每次進完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統；樣品中存在未知物，改進樣品的預處理；流動相污染，更換新流動相，盡可能現配現用，隔夜的流動相再次使用時要過濾；盡可能使用HPLC級試劑；流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除。

　　10)出現平頭峰。解決方法：檢測器設置不正確；進樣體積太大或樣品濃度太高。
 

　　3、基線漂移
 

　　一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要半個小時的平衡時間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長，但如果你在實驗過程中發現基線漂移，則你要考慮下面的原因：

　　1)流通池被污染或有氣體。解決方法：用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(斷開柱子更好)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)；

　　2)柱溫波動。解決方法：控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調對著柱溫箱；

　　3)紫外燈能量不足。解決方法：更換新的紫外燈；

　　4)檢測器沒有設定在大吸收波長處。解決方法：將波長調整至大吸收波長處；

　　5)流動相污染、變質或由低品質溶劑配成。解決方法：檢查流動相的組成，使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑；

　　6)樣品中有強保留的物質(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個逐步升高的基線。解決方法：使用保護柱，如有必要，在進樣之間。在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子；

　　7)流動相的PH值沒有調節好。解決方法：加適量的酸或堿調至合適PH值。
 

　　總的來說，在遇到問題時，需要按照排除法依次確定導致問題的原因，之后要做的就是修正和調整并且記錄問題，只要做好這樣的工作就不怕以后會出現問題。